蔗糖合成酶（Sucrose synthase，SS）試劑盒說明書

點擊次數：1097　日期：2016/8/29 8:33:17

分光光度法 50 管/48 樣

測定意義

蔗糖是源（葉片等）光合產物向“庫”器官運輸的主要形態。SS（EC 2.4.1.13）催化植物體內游離果糖和葡萄糖合成蔗糖。

測定原理

SS 催化游離果糖與葡萄糖供體 UDPG 反應生成蔗糖，蔗糖與間苯二酚反應可呈現顏色變化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小與顏色的深淺成正比。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；試劑一：液體 10mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存試劑四：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準備：

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

混勻，80℃水浴保溫 10min，冷卻后，以蒸餾水調零，480nm 下測定各管吸光值。

SS 活性計算

1、按照蛋白濃度計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS 活性(U/mg prot)=(C 標準管×V1×A 測定管÷A 標準管)÷(V1×Cpr)÷T=100×A 測定管÷A 標準管÷Cpr

2、按照樣本鮮重計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

SS 活性(U/g 鮮重) = (C 標準管×V1×A 測定管÷A 標準管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×A 測定管÷A

標準管÷W

C 標準管：標準管濃度，1000μg/mL；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03mL； V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T ：反應時間：10min。

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