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細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗(yàn)

點(diǎn)擊次數(shù):1097 日期:2016/8/8 8:46:46

細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒試驗(yàn)
 
    細(xì)胞毒是細(xì)胞介導(dǎo)免疫的主要效應(yīng)之一,是機(jī)體的一種免疫監(jiān)督機(jī)制,因此,細(xì)胞毒試驗(yàn)(包括NK,ADCC,LAK,TIL,CTL等)是一項(xiàng)重要的免疫指標(biāo)。傳統(tǒng)的同位素示蹤、染料排斥、熒光法等都有同位素污染、人為因素影響等缺點(diǎn)。FCM法綜合了上述常規(guī)法的優(yōu)點(diǎn),越來(lái)越引起臨床醫(yī)學(xué)家的重視。
   碘化丙啶(Propidium  Iodide,PI)染料排斥法  利用PI可以滲透到死細(xì)胞內(nèi)使核染色的特點(diǎn),用FCM分析死亡靶細(xì)胞比例。此方法還有一個(gè)51Cr釋放法不能比擬的長(zhǎng)處,即不但可以測(cè)定單次細(xì)胞毒試驗(yàn)(SCCA),也可以觀察NK細(xì)胞的再循環(huán)殺傷作用,即:效應(yīng)細(xì)胞殺死一個(gè)靶細(xì)胞后,可再殺傷其他細(xì)胞的能力,稱之總細(xì)胞毒試驗(yàn)(TCCA)。
   FDA-FCM試驗(yàn)   基本原理同PI排斥法,但它同前者相反,是以熒光染料FDA在活細(xì)胞內(nèi)滯留,以計(jì)算活細(xì)胞數(shù)為基礎(chǔ)。FDA可以穿通活的細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi),受胞內(nèi)脂酶水解,產(chǎn)生熒光物質(zhì)留于胞內(nèi);細(xì)胞受殺傷時(shí),染料排出,以確定殺傷效應(yīng)。
細(xì)胞光掃描法  通過(guò)靶細(xì)胞受效應(yīng)細(xì)胞殺傷后發(fā)生形態(tài)的改變及光掃描特性變化,在排除效應(yīng)細(xì)胞群體后,用特設(shè)的閾值把死活的兩群靶細(xì)胞分開(kāi),計(jì)算殺傷效應(yīng)。
也有學(xué)者用雙標(biāo)記細(xì)胞毒法,即用綠熒光色素標(biāo)記效應(yīng)細(xì)胞,用紅色熒光素標(biāo)記靶細(xì)胞,在細(xì)胞裂解前,用FCM定量測(cè)定效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞的結(jié)合體形成。

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