萘醌類化合物的生產工藝（標準品）

從化學結構而言，其他脂類化合物主要有泛醌類的輔酶Q10和萘醌類的紫草素。紫草素具有顯著的抗生育、抗炎、抗腫瘤、殺菌抗病毒、保肝和免疫調節等作用。由于紫草野生資源較少，難于人工訓話培養，大量采挖勢必造成資源枯竭及生態環境的破壞，借助植物細胞可避免由于過量采伐造成的生態環境的破壞。20試劑70-80年代，日本學者Tabata等最早成功誘導處硬紫草的愈傷組織，并影響紫草寧及其衍生物產量的條件進行了研究。80年代后期，我國學者也對紫草的組織培養進行了多方面的研究。目前，紫草素主要通過植物材料提取和組織培養的方法進行工業化的生產。

愈傷組織誘導

將紫草成熟種子置于含有mol/L 2,4-D和mol/L 激動素的LS瓊脂培養基（瓊脂1%）上，一直在黑暗、25℃下培養。種子萌發后于幼根部形成愈傷組織，再將此愈傷組織移植至含mol/L IAA和mol/L激動素LS瓊脂培養基中。

繼代培養

將獲得的1.5g鮮重愈傷組織移入裝有80mL含有mol/L IAA和mol/L激動素LS液體培養基的300mL 三角瓶中，在100r/min轉速下振蕩培養，使細胞增殖。培養初起由于瓊脂培養細胞產生紫草素易變質，細胞外觀及不均一，但經14d培養的細胞轉入新鮮培養基后，生長迅速的白色細胞大量繁殖，以后每隔14d移入新鮮培養基，經2-3代培養后，即可獲得均一的細胞團。這樣均一的細胞團經14d培養后增加約13倍。細胞移植時，用不銹鋼制孔徑40um的篩網手機細胞，按80mL培養基加1.5g鮮重細胞的比例進行接種。

一級培養（細胞的增殖培養）標準品

接種在LS培養基內繼代培養14d后，用如前所述的方法手機細胞，將1.5g鮮重細胞接種在80mL IMG-5培養基中，進行振蕩培養，在細胞增加6-7倍后，自第10-11天掐對數增長長期結束，增殖速度開始降低。生產紫草素的種細胞的生長階段對第2階段在M-9培養基中的培養有很大影響。用對數增殖期的細胞作為種細胞，紫草素的得率最高。因此，從細胞收獲量和紫草素生產考慮，在移植后的第9天結束第1階段最為合適。此外MG-5培養基不含植物激素，所以不能用于維持細胞株的繼代。

二級培養（生產紫草素的培養）標準品

如前述方法手機以及培養所得細胞，將2.4g鮮重細胞移入裝有80mL M-9培養基300mL 三角瓶中，在100r/min轉速下振蕩培養。從培養第2天起，一部分細胞即呈紅色，至第7天全部細胞完全呈鮮紅色。經14d培養的細胞中紫草素含量為15%，即1L培養基中紫草素的收獲量為15g.

產物的同步提取標準品

在培養過程中，細胞會將紫草素沖胞內分泌到胞外，附著的細胞壁表面，影響細胞對氧氣和營養物質的吸收，抑制細胞生長和紫草素的合成，因此，使用某些有機溶劑在培養過程中同步萃取紫草素，即簡化了次生代謝物的分離提純工作，又降低了產物的反饋抑制。標準品在培養過程中添加維生素C，L-苯丙氨酸和正十六烷聚能提高紫草素產率，其中正十六烷效率最好，提高了5.8倍；加入0.12%的Tween-20.硬紫草細胞合成色素總產量達么可干細胞含18.15mg，比對照提高了4.2倍。另外，在培養過程中加入大孔吸附樹脂吸附紫草色素，可使色素的產量提高6倍。

固定化培養技術

固定化培養運用于植物細胞已有幾十年的歷史，由于固定化技術可以反復利用細胞，增加細胞密度，大幅度提高有效成分的產量，目前，固定化培養議程為利用植物細胞培養生產次生物質研究的一個重要方向。吧硬紫草細胞包埋在海藻酸鈣中固定化培養，30d后色素外泌達70%，而懸浮細胞僅有30%。如同時使用正十六烷進行萃取，色素外泌可達95%。研究表明固定化培養過程中，45d更換一次培養基，則180d后，細胞仍有產生色素的能力。