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苯丙氨酸解氨酶

點擊次數：1141　日期：2018/3/12 14:37:12

苯丙氨酸解氨酶（Phenylalnine ammonialyase，PAL）試劑盒 分光光度法 50管/48樣

注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

PAL（EC4. 3 1 5）廣泛存在于各種植物和少數微生物中，是植物體內苯丙烷類代謝的

關鍵酶，與一些重要的次生物質如木質素、異黃酮類植保素、黃酮類色素等合成密切相關，

在植物正常生長發育和抵御病菌侵害過程中起重要作用。

測定原理

PAL催化 L-苯丙氨酸裂解為反式肉桂酸和氨，反式肉桂酸在 290nm處有最大吸收值，

通過測定吸光值升高速率計算 PAL活性。

所需的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰

和蒸餾水。

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體 40mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×3 瓶，4℃保存。臨用前每瓶加入 4mL 蒸餾水水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 2.5mL×1瓶，4℃保存。

粗酶液提取

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL

提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

試劑名稱（μL）	測定管	對照管
樣本	20
試劑一	700	800
試劑二	200	200
混勻，30℃ 準確水浴 30min
試劑三	40	40

混勻，靜置10min后，290nm處記錄測定管吸光值A1和對照管吸光值A2，△A=A1-A2。

注意：對照管只要做一管

PAL活性計算

（1）按蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶

活性單位。

PAL（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（Cpr×V樣）÷0.1÷T =17.3×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每mL反應體系中每min使290nm下吸光值變化0.1為一個酶活性單位。

PAL（U/g鮮重）＝ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.1÷T =17.3×ΔA÷W

V反總：反應體系總體積，1.04mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液

體積，1 mL；T：反應時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；

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